El tampón TBE (Tris-borato-EDTA) es una solución tampón compuesta de base Tris, ácido bórico y EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). Este tampón se usa a menudo para la electroforesis en gel de agarosa en el análisis de productos de ADN que resultan de la amplificación por PCR, protocolos de purificación de ADN o experimentos de clonación de ADN.
Usos TBE
El tampón TBE es particularmente útil para la separación de fragmentos de ADN más pequeños (MW <1000), como productos pequeños de enzima restrictiva Digests. TBE tiene una mayor capacidad de almacenamiento en búfer y proporcionará una resolución más nítida que el buffer de TAE. El tampón TAE (Tris-acetato-EDTA) es una solución compuesta de base Tris, ácido acético y EDTA.
La TBE es generalmente más costosa que la TAE e inhibe la ADN ligasa, lo que puede causar problemas si se intentan las etapas de purificación y ligadura de ADN posteriores. Con los tres pasos simples que siguen, aprenda a hacer un búfer TBE. No debería tomar más de unos 30 minutos para crear.
Que necesitas
Para hacer el tampón TBE, necesitará solo cuatro sustancias. Los elementos restantes en esta lista son equipos. Las cuatro sustancias requeridas son sal de disodio EDTA, base Tris, ácido bórico y agua desionizada.
En cuanto al equipo, necesitará un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. Además, querrás unos vasos o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros. Completan las necesidades de su equipo cilindros graduados, barras de agitación y placas de agitación.
Revise el inventario en el laboratorio que usará para asegurarse de tener todo lo que necesita antes de comenzar. Nada es peor que tener que detenerse en medio de la preparación de una solución porque se ha quedado sin los materiales adecuados.
Si su laboratorio está en la escuela o en su lugar de trabajo, verifique con el personal adecuado para ver si tienen todos los artículos en stock. Hacerlo puede ahorrarle tiempo y energía al final.
El peso de la fórmula se abrevia como FW. Es el peso atómico de un elemento multiplicado por el número de átomos de cada elemento en una fórmula, luego sumando todas las masas de cada elemento.
Solución de stock de EDTA
Una solución EDTA debe prepararse con anticipación. EDTA no entrará completamente en la solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0.5 M, pese 93.05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372.2). Luego disuélvalo en 400 mililitros de agua desionizada y ajuste el pH con NaOH (hidróxido de sodio). Después de eso, complete la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.
Solución madre de TBE
Haga una solución madre concentrada (5x) de TBE pesando 54 gramos de base Tris (FW = 121.14) y 27.5 gramos de ácido bórico (FW = 61.83) y disolviendo ambos en aproximadamente 900 mililitros de desionizados agua. Luego agregue 20 mililitros de 0.5 M (molaridad, o la concentración) EDTA (pH 8.0) y ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución se puede almacenar a temperatura ambiente, pero se formará un precipitado en soluciones más antiguas. Almacene el tampón en botellas de vidrio y deséchelo si se ha formado un precipitado.
Solución de trabajo de TBE
Para la electroforesis en gel de agarosa, se puede usar un tampón TBE a una concentración de 0,5x (dilución 1:10 del material concentrado). Diluir la solución madre en 10 veces en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son Tris-borato 45 mM y EDTA 1 mM (milimolar). El búfer ahora está listo para usar en correr un gel de agarosa.