PBS o tamponado con fosfato solución salina una solución tampón esto es particularmente valioso porque imita la concentración de iones, la osmolaridad y el pH de los fluidos corporales humanos. En otras palabras, es isotónico para las soluciones humanas, por lo que es menos probable que cause daño celular, toxicidad o precipitación no deseada en investigaciones biológicas, médicas o bioquímicas.
Composición Química PBS
Hay varias recetas para preparar la solución de PBS. La solución esencial contiene agua, hidrógeno fosfato de sodio y cloruro de sodio. Algunas preparaciones contienen cloruro de potasio y dihidrógeno fosfato de potasio. EDTA también se puede agregar en la preparación celular para evitar la aglomeración.
La solución salina tamponada con fosfato no es ideal para uso en soluciones que contienen cationes divalentes (Fe2+, Zn2+) porque puede producirse precipitación. Sin embargo, algunas soluciones de PBS contienen calcio o magnesio. Además, tenga en cuenta que el fosfato puede inhibir las reacciones enzimáticas. Tenga especial cuidado con esta desventaja potencial cuando trabaje con ADN. Si bien PBS es excelente para la ciencia fisiológica, tenga en cuenta que el fosfato en una muestra tamponada con PBS puede precipitarse si la muestra se mezcla con etanol.
Una composición química típica de 1X PBS tiene una concentración final de 10 mM PO43−, NaCl 137 mM y KCl 2,7 mM. Aquí está la concentración final de reactivos en la solución:
| sal | Concentración (mmol / L) | Concentración (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| N / A2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2correos4 | 1.8 | 0.24 |
Protocolo para hacer solución salina tamponada con fosfato
Dependiendo de su propósito, puede preparar PBS 1X, 5X o 10X. Muchas personas simplemente compran tabletas de tampón PBS, las disuelven en agua destilada y ajustan el pH según sea necesario. con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. Sin embargo, es fácil hacer la solución desde cero. Aquí hay recetas para solución salina tamponada con fosfato 1X y 10X:
Reactivo |
Cantidad agregar (1 ×) |
Concentración final (1 ×) |
Cantidad a agregar (10 ×) |
Concentración final (10 ×) |
| NaCl | 8 g |
137 mM | 80 g |
1,37 M |
| KCl | 0,2 g |
2,7 mM | 2 g |
27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g |
10 mM | 14,4 g |
100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g |
1,8 mM | 2,4 g |
18 mM |
Opcional: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g |
1 mM | 1,33 g |
10 mM |
MgCl2 • 6H2O |
0,10 g | 0.5 mM |
1,0 g | 5 mM |
- Disolver las sales reactivas en 800 ml de agua destilada.
- Ajuste el pH al nivel deseado con ácido clorhídrico. Por lo general, esto es 7.4 o 7.2. Use un medidor de pH para medir el pH, no el papel de pH u otra técnica imprecisa.
- Agregue agua destilada para lograr un volumen final de 1 litro.
Esterilización y almacenamiento de solución de PBS
La esterilización no es necesaria para algunas aplicaciones, pero si la está esterilizando, dispense la solución en alícuotas y esterilice en autoclave durante 20 minutos a 15 psi (1.05 kg / cm)2) o utilice esterilización por filtro.
Solución salina tamponada con fosfato puede ser almacenado a temperatura ambiente. También puede refrigerarse, pero las soluciones 5X y 10X pueden precipitar cuando se enfría. Si debe enfriar una solución concentrada, primero almacénela a temperatura ambiente hasta que esté seguro de que las sales se han disuelto por completo. Si se produce precipitación, el calentamiento de la temperatura los devolverá a la solución. La vida útil de la solución refrigerada es de 1 mes.
Diluir una solución 10X para hacer 1X PBS
10X es una solución concentrada o de reserva, que puede diluirse para obtener una solución 1X o normal. Una solución 5X debe diluirse 5 veces para hacer una dilución normal, mientras que una solución 10X debe diluirse 10 veces.
Para preparar una solución de trabajo de 1 litro de 1X PBS a partir de una solución 10X PBS, agregue 100 ml de la solución 10X a 900 ml de agua. Esto solo cambia la concentración de la solución, no el gramo o la cantidad molar de los reactivos. El pH no debe verse afectado.
PBS versus DPBS
Otra solución tampón popular es la solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco o DPBS. DPBS, como PBS, se usa para investigación biológica y soluciones amortiguadoras en el rango de pH de 7.2 a 7.6. Se puede almacenar a temperatura ambiente. La solución de Dulbecco contiene una concentración más baja de fosfato. Es 8.1 mM mM de iones fosfato, mientras que el PBS regular es 10 mM fosfato. La receta para 1x DPBS es:
| Reactivo | Cantidad a agregar (1x) |
| NaCl | 8,007 g |
| KCl | 0,201 g |
| N / A2HPO4 | 1.150 g |
| KH2correos4 | 0.200 g |
| Opcional: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
Disolver las sales en 800 ml de agua. Ajuste el pH a 7.2 a 76 usando ácido clorhídrico. Ajuste el volumen final a 1000 ml con agua. Autoclave a 121 ° C durante 20 minutos.
Fuentes
- Dulbecco, R.; et al. (1954). "Formación de placas y aislamiento de líneas puras con virus de poliomielitis.". J. Exp. Medicina. 99 (2): 167–182.
- "Solución salina tamponada con fosfato (PBS". Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratorio de prensa.