Guía para hacer un tampón simple de fosfato

En química, un buffersolución sirve para mantener un pH estable cuando se introduce una pequeña cantidad de ácido o base en una solución. Una solución tampón de fosfato es especialmente útil para aplicaciones biológicas, que son especialmente sensibles a los cambios de pH, ya que es posible preparar una solución cerca de cualquiera de los tres niveles de pH.

Los tres valores de pKa para el ácido fosfórico (del Manual CRC de Química y Física) son 2.16, 7.21 y 12.32. El fosfato monosódico y su base conjugada, el fosfato disódico, se utilizan generalmente para generar amortiguadores de valores de pH alrededor de 7, para aplicaciones biológicas, como se muestra aquí.

• Nota: Recuerde que pKa no se mide fácilmente a un valor exacto. Valores ligeramente diferentes pueden estar disponibles en la literatura de diferentes fuentes.

Hacer este búfer es un poco más complicado que hacer búferes TAE y TBE, pero el proceso no es difícil y debería tomar solo unos 10 minutos.

Para hacer su tampón de fosfato, necesitará los siguientes materiales:

• Fosfato monosódico
• Fosfato de disodio.
• Ácido fosfórico o hidróxido de sodio (NaOH)
• medidor de pH y sonda
• Matraz volumétrico
• Cilindros graduados
• Vasos de precipitados
• Barras de agitación
• Placa de agitación

Antes de hacer un tampón, primero debe saber qué molaridad desea que sea, qué volumen hacer y cuál es el pH deseado. La mayoría de los tampones funcionan mejor a concentraciones entre 0.1 M y 10 M. El pH debe estar dentro de 1 unidad de pH del ácido / base conjugada pKa. Para simplificar, este cálculo de muestra crea 1 litro de búfer.

Use la ecuación de Henderson-Hasselbalch (HH) (a continuación) para determinar qué proporción de ácido a base se requiere para hacer un tampón del pH deseado. Use el valor de pKa más cercano a su pH deseado; la relación se refiere al par conjugado ácido-base que corresponde a ese pKa.

Ecuación HH: pH = pKa + log ([Base] / [Ácido])

Para un tampón de pH 6.9, [Base] / [Ácido] = 0.4898

Sustituir por [Ácido] y Resolver por [Base]

La molaridad deseada del buffer es la suma de [Acid] + [Base].

Para un búfer de 1 M, [Base] + [Ácido] = 1 y [Base] = 1 - [Ácido]

Al sustituir esto en la ecuación de razón, desde el paso 2, obtienes:

[Ácido] = 0.6712 moles / L

Resolver para [ácido]

Usando la ecuación: [Base] = 1 - [Ácido], puede calcular eso:

[Base] = 0.3288 moles / L

Después de haber usado el Henderson-Hasselbalch Para calcular la proporción de ácido a base requerida para su tampón, prepare un poco menos de 1 litro de solución utilizando las cantidades correctas de fosfato monosódico y fosfato disódico.

Use una sonda de pH para confirmar que se alcanza el pH correcto para el tampón. Ajuste ligeramente según sea necesario, usando ácido fosfórico o hidróxido de sodio (NaOH).

Una vez que se alcanza el pH deseado, lleve el volumen del tampón a 1 litro. Luego diluya el tampón como lo desee. Este mismo tampón se puede diluir para crear tampones de 0.5 M, 0.1 M, 0.05 M, o cualquier cosa intermedia.

Aquí hay dos ejemplos de cómo se puede calcular un tampón de fosfato, según lo descrito por Clive Dennison, Departamento de Bioquímica de la Universidad de Natal, Sudáfrica.

El requisito es un tampón de fosfato de sodio 0,1 M, pH 7,6.

En la ecuación de Henderson-Hasselbalch, pH = pKa + log ([sal] / [ácido]), la sal es Na2HPO4 y el ácido es NaHzPO4. Un tampón es más efectivo en su pKa, que es el punto donde [sal] = [ácido]. De la ecuación está claro que si la [sal]> [ácido], el pH será mayor que el pKa, y si [sal]

NaH2PO4 + NaOH - + Na2HPO4 + H20.

Una vez que la solución se ha ajustado al pH correcto, se puede diluir (al menos durante un período pequeño rango, de modo que la desviación del comportamiento ideal es pequeña) al volumen que dará el deseado molaridad La ecuación de HH establece que la relación de sal a ácido, en lugar de sus concentraciones absolutas, determina el pH. Tenga en cuenta que:

• En esta reacción, el único subproducto es el agua.
• La molaridad del tampón está determinada por la masa del ácido, NaH2PO4, que se pesa, y el volumen final al que se compone la solución. (Para este ejemplo, se requerirían 15,60 g de dihidrato por litro de solución final).
• La concentración de NaOH no es preocupante, por lo que se puede usar cualquier concentración arbitraria. Por supuesto, debe concentrarse lo suficiente como para efectuar el cambio de pH requerido en el volumen disponible.
• La reacción implica que solo se requiere un cálculo simple de molaridad y un solo pesaje: solo uno es necesario inventar la solución, y todo el material pesado se usa en el búfer, es decir, no hay residuos.

Tenga en cuenta que no es correcto pesar la "sal" (Na2HPO4) en primera instancia, ya que esto da un subproducto no deseado. Si se prepara una solución de la sal, su pH estará por encima del pKa y requerirá la titulación con un ácido para bajar el pH. Si se usa HC1, la reacción será:

Na2HPO4 + HC1 - + NaH2PO4 + NaC1,

produciendo NaC1, de una concentración indeterminada, que no se desea en el tampón. A veces, por ejemplo, en una elución de gradiente de fuerza iónica de intercambio iónico, se requiere tener un gradiente de, por ejemplo, [NaC1] superpuesto en el tampón. Luego se requieren dos memorias intermedias, para las dos cámaras del generador de gradiente: la memoria intermedia de inicio (es decir, la memoria intermedia de equilibrio, sin NaC1 agregado, o con el concentración inicial de NaC1) y el tampón de acabado, que es el mismo que el tampón de inicio pero que además contiene la concentración final de NaC1. Al preparar el tampón de acabado, se deben tener en cuenta los efectos iónicos comunes (debido al ión sodio).

Ejemplo como se señala en la revista Biochemical Education16(4), 1988.

El requisito es un tampón de acabado con gradiente de fuerza iónica, tampón de fosfato de sodio 0,1 M, pH 7,6, que contiene NaCl 1,0 M.

En este caso, el NaC1 se pesa y se forma junto con el NaHEPO4; Los efectos iónicos comunes se tienen en cuenta en la titulación y, por lo tanto, se evitan los cálculos complejos. Para 1 litro de tampón, se disuelven NaH2PO4.2H20 (15,60 g) y NaC1 (58,44 g) en aproximadamente 950 ml de H2O destilada, se tituló a pH 7,6 con una solución de NaOH bastante concentrada (pero de concentración arbitraria) y se completó hasta 1 litro.

Ejemplo como se señala en la revista Biochemical Education16(4), 1988.