El tampón TAE es una solución compuesta de base Tris, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA). Es históricamente el tampón más común utilizado para el gel de agarosa. electroforesis en los análisis de productos de ADN resultantes de PCR amplificación, ADN protocolos de purificación o Clonación de ADN experimentos
Este tampón tiene baja fuerza iónica y baja capacidad de tamponamiento. Es el más adecuado para la electroforesis de piezas grandes de ADN (> 20 kilobases) y deberá reemplazarse con frecuencia o recircularse durante más tiempo (> 4 horas) de gel. Con eso en mente, es posible que desee considerar hacer varios lotes del búfer.
Dado que el búfer es fácil de hacer y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer que más de un lote a la vez no sea particularmente lento o difícil. Usando las instrucciones a continuación, debe tomar solo 30 minutos para hacer el búfer TAE.
Lo que necesita para el buffer TAE
Dado que hacer el búfer TAE solo requiere un conjunto rápido y simple de instrucciones, la cantidad de materiales necesarios para ello no es excesiva. Solo necesitará sal disódica de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), base Tris y ácido acético glacial.
Hacer el tampón también requiere un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. También necesitará vasos o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros, así como cilindros graduados. Finalmente, necesitará agua desionizada, barras agitadoras y platos agitadores.
En las siguientes instrucciones, el peso de la fórmula (la masa atómica de cada elemento se multiplica por el número de átomos, luego la masa de cada uno se suma) se abrevia como FW.
Prepare una solución de stock de EDTA
Una solución EDTA se prepara con anticipación. EDTA no entrará completamente en una solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para un stock de 500 mililitros solución de 0,5 M (molaridad o concentración) de EDTA, pesar 93,05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372,2). Disuélvalo en agua desionizada de 400 mililitros y ajuste el pH con hidróxido de sodio (NaOH). Rellene la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.
Crea tu solución de stock
Prepare una solución madre concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramos de base Tris (FW = 121.14) y disolviéndola en aproximadamente 750 mililitros de agua desionizada. Con cuidado, agregue 57.1 mililitros de ácido glacial y 100 mililitros de 0.5 M EDTA (pH 8.0).
Después de eso, ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución madre puede almacenarse a temperatura ambiente. El pH de este tampón no está ajustado y debe ser de aproximadamente 8,5.
Prepare una solución de trabajo de TAE Buffer
La solución de trabajo del tampón TAE 1x se realiza simplemente diluyendo la solución madre en 50 veces en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son Tris-acetato 40 mM (milimolar) y EDTA 1 mM. El tampón ahora está listo para usar en la ejecución de un gel de agarosa.
Terminando
Verifique el inventario antes de comenzar a asegurarse de tener todos los materiales anteriores para el búfer TAE. El personal de suministros debe poder decirle si tiene todos los artículos que necesita en stock. No querrás terminar perdiendo algo en medio del procedimiento.