El polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP) es un método molecular de análisis genético que permite identificar a los individuos en función de patrones únicos de enzima restrictiva corte en regiones específicas de ADN.
También conocido como Análisis RFLP, la técnica aprovecha el polimorfismos en códigos genéticos de personas individuales. Aunque todos los miembros de una especie tienen esencialmente la misma composición genética, estas ligeras diferencias explican las variaciones en el fenotipo, como la apariencia o el metabolismo, entre los individuos.
Técnica de análisis de RFLP
La técnica de análisis RFLP implica cortar una región particular de ADN con variabilidad conocida, con enzimas de restricción, luego separando los fragmentos de ADN por electroforesis en gel de agarosa y determinando el número de fragmentos y tamaños relativos.
Una enzima de restricción es una enzima, una molécula de proteína, que corta el ADN en los sitios de restricción. En esencia, la muestra de ADN se descompone y se digiere por las enzimas de restricción. Los fragmentos resultantes se separan de acuerdo con sus longitudes, y el patrón de los tamaños de los fragmentos será diferente para cada individuo analizado.
El proceso completo de RFLP requiere etiquetado de sonda, fragmentación de ADN, electroforesis, transferencia, hibridación, lavado y autorradiografía. El RFLP detectado se visualiza usando una película de rayos X en autorradiografía, donde los fragmentos de ADN se pueden ver y analizar después de que se separan entre sí por electroforesis.
Solicitud de uso de RFLP
Algunas de las aplicaciones para el análisis RFLP incluyen:
- Huella de ADN: Los científicos forenses pueden usar el análisis RFLP para identificar sospechosos basados en muestras de evidencia recolectadas en escenas de crímenes.
- Paternidad: RFLP también se utiliza en la determinación de paternidad o para rastrear ascendencia.
- Diversidad genetica: La técnica se puede utilizar para estudiar la evolución y la migración de la vida silvestre, estudiar los patrones de reproducción en las poblaciones animales y la detección y diagnóstico de ciertas enfermedades.
La técnica de usar la detección de variación de RFLP en genomas es una herramienta vital en el mapeo genómico y el análisis de enfermedades genéticas. Si se busca la ubicación de un gen de enfermedad en particular en un determinado cromosoma, entonces los investigadores analizar el ADN de los miembros de una familia con la enfermedad, luego buscar patrones similares de herencia en RFLP alelos
Una vez que se localiza un gen de la enfermedad, realizar un análisis RFLP en otros miembros de la familia podría revelar un portador de los genes mutantes o señalar el riesgo general de la enfermedad. Es importante tener en cuenta que la técnica RFLP no se usa ampliamente ahora que se utilizan técnicas más nuevas y más robustas para el análisis de ADN en la ciencia forense y en varios otros campos.
Aspectos negativos pf RFLP
Desafortunadamente, la técnica de análisis RFLP es tediosa y lenta. Además de requerir una gran cantidad de muestra de ADN, la muestra generalmente necesitaría ser aproximadamente del tamaño de una cuarta parte, que es relativamente grande para muestras de ADN: el proceso, desde el etiquetado de la sonda hasta el lavado y la autorradiografía, puede demorar hasta un mes completo completar.
Los resultados del Proyecto Genoma Humano han reemplazado prácticamente la necesidad de RFLP. El proyecto permitió determinar la secuencia completa del ADN que se encuentra en las células humanas, el genoma humano, y para identificar todos los genes en el genoma humano.